農藥殘留檢測儀蔬菜中有機磷國標檢測方法1. 范圍 

本標準規定了由酶抑制法測定蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢驗方法。

本標準適用于蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速篩選測定。測試方法  酶抑制率法

2. 原理

在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農藥的濃度呈正相關。正常情況下，酶催化神經傳導代謝產物（乙酰膽堿）水解，其水解產物與顯色劑反應，產生黃色物質，用分光光度計在410nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在。

3.試劑

3.1 pH8.0緩沖溶液：分別取43.5g無水磷酸氫二鉀與2.2g磷酸二氫鉀，用510mL蒸餾水溶解。

3.2 顯色劑：分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20mL緩沖溶液溶解，4°C冰箱中保存。

3.3 底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.1mL蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存備用。保存期不超過十天。

3.4 乙酰膽堿酯酶：根據酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3 min的吸光度變化D A0值應控制在0. 3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存備用，保存期不超十天。

3.5 可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的ΔA0值應控制在0.3以上。

4 儀器

4.1 GY-NC農藥殘留檢測儀。

4.2常量天平。

4.3 恒溫水浴或恒溫箱

5 分析步驟

5.1 樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，靜制十五分鐘，之間需振蕩幾次，待用。

5.2 對照溶液測試： 先于試管中加入2.5mL緩沖溶液，依次加入0.lmL酶液、0.1mL顯色劑、0.lmL底物搖勻，此時檢液開始顯色反應，應立即放入儀器比色池中，記錄反應3 min的吸光度變化值ΔA0。

5.3 樣品溶液測試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對照溶液測試相同，但在加底物之前必須放置15分鐘，記錄反應3min的吸光度變化值ΔAt。

6 結果的表述計算

6.1 結果計算

檢測結果按公式計算：抑制率(%)=[ (ΔA0-ΔAt)/ ΔA0]×100 

式中：ΔA0 －對照溶液反應3min吸光度的變化值； 

ΔAt －樣品溶液反應3min吸光度的變化值；

6.2 結果判定

結果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥存在，樣品為陽性結果。陽性結果的樣品需要重復檢驗2次以上。

對陽性結果的樣品，可用其它方法進一步確定具體農藥品種和含量。

7 附則

7.1酶抑制率法技術指標

7.1.1 靈敏度指標：酶抑制率法對部分農藥的檢出限見表2酶抑制率法對部分農藥的檢出限

表2 酶抑制率法對部分農藥的檢出限

農藥名稱 檢出限mg/kg 農藥名稱 檢出限mg/kg

敵敵畏 0.1 氧化樂果 0.8

對硫磷 1.0 甲基異柳磷 5.0

辛硫磷 0.3 滅多威 0.1

甲胺磷 2.0 丁硫克百威 0.05

馬拉硫磷 4.0 敵百蟲 0.2

樂果 3.0 呋南丹 0.05

7.1.2 符合率：在檢出的抑制率≥50％的30份以上樣品中，經氣相色譜法驗證，陽性結果的符合率應該在80％以上。

8說明

8.1蔥、蒜、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的次生物質，容易產生假陽性。處理這類樣品時，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，減少色素的干擾。

8.2 當溫度條件低于37度，酶反應的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應的時間應相應延長，延長時間的確定，應以膽堿酯酶空白對照測試3min吸光度變化差值在0.3以上，即可往下操作。注意樣品放置時間應與空白對照溶液放置時間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對照測試3min吸光度變化差值在0.3以下的原因：一是酶的活性不夠，二是溫度太低。